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豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見問題解答

更新時間:2020-07-27      瀏覽次數:1644
   豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見問題解答
  豚鼠ELISA試劑盒操作流程如下:
  (1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
  (2)酶標板置4℃,包被過夜。
  (3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
  (4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
  (5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
  (6)洗板,同(4)。
  (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
  (8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
  (9)洗板,同(4)。
  (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
  (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
  (12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
  (13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
  介紹一下豚鼠ELISA試劑盒實驗操作的常見問題。
  一、一次ELISA實驗需要多長時間?
  雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時,競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時。
  二、血清樣本如何處理?
  全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
  三、血漿樣本如何處理?
  建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
  四、細胞上清液樣本如何處理?
  檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細收集上清。
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